Western Blot技术是一种用于检测特定蛋白质在样品中的存在与否以及其相对表达量的方法。它结合了凝胶电泳和免疫学技术，能够提供关于蛋白质大小和特异性的信息。
首先，样本通过SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）进行分离。在这个过程中，蛋白质根据其分子量的不同被分离成条带。然后，这些分离好的蛋白质会被转移到固相载体上，通常是硝酸纤维素膜或PVDF膜。这个步骤称为印迹，目的是将蛋白质从凝胶中转移到膜上以便后续的免疫反应。
接下来是封闭步骤，使用非特异性结合位点封闭剂来减少背景信号。随后，加入一抗，即针对目标蛋白的特异性抗体。一抗与膜上的目标蛋白结合后，再加入二抗，这种抗体标记有酶或者荧光物质，可以与一抗发生特异性结合。
最后，通过添加底物显色或者使用荧光扫描仪来检测目标蛋白的位置和强度。Western Blot不仅能够定性地确认某种蛋白的存在，还可以定量分析蛋白质的表达水平变化。
总之，Western Blot是一项重要的生物化学实验技术，在基础研究及临床诊断中都有广泛的应用。通过这一技术，科学家们可以深入了解细胞内各种生理过程中的蛋白质动态变化。
